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      細(xì)胞凋亡檢測的常用檢測方法有這幾種

      更新時(shí)間:2022-04-19點(diǎn)擊次數(shù):1012
        要了解細(xì)胞凋亡檢測方法,首先要了解細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化,形態(tài)學(xué)觀察表明細(xì)胞凋亡的變化是多階段的。細(xì)胞凋亡往往涉及多個(gè)細(xì)胞,甚至少數(shù)細(xì)胞也異步發(fā)生。首先細(xì)胞體積縮小,連接消失,與周圍細(xì)胞分離,然后細(xì)胞質(zhì)密度增加,隨后會發(fā)生一系列變化:線粒體膜電位消失;滲透率變化;將細(xì)胞c釋放到細(xì)胞質(zhì)中;核質(zhì)濃度、核膜和核仁碎裂;DNA被降解成180bp-200bp左右的片段,在細(xì)胞膜內(nèi)形成囊泡;絲氨酸膜表面轉(zhuǎn)向磷脂膜內(nèi)側(cè);細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)仍然完好無損。可以將凋亡細(xì)胞的殘骸分割包裹成若干個(gè)凋亡小體而不會溢出。
        
        細(xì)胞凋亡檢測通常包括形態(tài)學(xué)觀察、DNA凝膠電泳、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、核小體試驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)和Westernblot檢測。
        
        1、形態(tài)觀察
        
        電鏡觀察:可見凋亡細(xì)胞表面微絨毛消失,核染色質(zhì)固縮和邊緣聚集,常呈新月形,核膜皺縮,細(xì)胞質(zhì)致密,細(xì)胞器集中,膜泡或“芽”和凋亡小體和凋亡小體被相鄰的吞噬細(xì)胞吞噬。
        
        2、DNA凝膠電泳
        
        細(xì)胞凋亡的主要生化特征是染色質(zhì)凝聚。染色質(zhì)DNA在核小體單元之間的連接處斷裂,形成一個(gè)180~200bp的整數(shù)寡核苷酸片段。該方法是判斷細(xì)胞是否發(fā)生凋亡的簡單方法,更適用于體外培養(yǎng)的非增殖細(xì)胞的檢測。
        
        3、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)核小體試驗(yàn)
        
        凋亡細(xì)胞的DNA斷裂導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)核小體。核小體由組蛋白及其伴隨的DNA片段組成,可通過ELISA檢測。
        
        細(xì)胞凋亡檢測步驟:
        
        (1)將凋亡細(xì)胞裂解并高速離心,上清液中含有核小體;
        
        (2)微量定量板上吸附組蛋白;
        
        (3)此外,抗組蛋白抗體與核小體上的組蛋白結(jié)合;
        
        (4)辛辣過氧化物酶標(biāo)記的抗DNA抗體與核小體上的DNA結(jié)合;
        
        (5)酶加底物,光度吸收值。
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