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原代心肌細(xì)胞研究要注意些什么？

作為主要的研究模型，原代心肌細(xì)胞被廣泛應(yīng)用于心血管研究。那么我們在研究過程中都要注意些什么呢？1、新生鼠年齡的選擇新生鼠心肌細(xì)胞在出生后3天內(nèi)具有部分增殖能力，而成年鼠心肌細(xì)胞為終末分化細(xì)胞，不再具有分裂增殖能力。因此，大鼠出生時間越短，離體心肌細(xì)胞存活率越高，越容易貼壁。大量觀察表明，選擇1～3日齡大鼠分離心肌細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)是理想的，尤其是半日齡大鼠。2、消化酶的選擇和使用新生大鼠原代心肌細(xì)胞間可采用組織塊法和消化法分離。前者較少使用，因?yàn)殡y以獲得密度均勻的細(xì)胞和控制成纖...

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一文帶你全面了解細(xì)胞因子

一文帶你全面了解細(xì)胞因子一、細(xì)胞因子的概念細(xì)胞因子（cytokine，CK），是由免疫細(xì)胞（如單核、巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等）和某些非免疫細(xì)胞（內(nèi)皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞等）經(jīng)刺激而合成、分泌的一類具有廣泛生物學(xué)活性的小分子蛋白質(zhì)（多肽或糖蛋白）。細(xì)胞因子的發(fā)現(xiàn)歷史1957年，發(fā)現(xiàn)干擾素（interferon，IFN）1969年，提出淋巴因子（lymphokine）的概念1974年，定名細(xì)胞因子（cytokine，CK）1975年，命名了腫瘤壞死因子（Tumo...

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RNA pull down實(shí)驗(yàn)技術(shù)

RNApulldown實(shí)驗(yàn)技術(shù)1.實(shí)驗(yàn)原理RNApulldown是體外研究RNA與蛋白互作的重要技術(shù)。該技術(shù)是用生物素標(biāo)記體外轉(zhuǎn)錄的靶RNA分子，再用鏈霉親和素純化出與靶RNA結(jié)合的蛋白復(fù)合體，洗脫得到RNA結(jié)合蛋白質(zhì)。再通過westernblot實(shí)驗(yàn)檢測特定的RNA結(jié)合蛋白是否與靶RNA結(jié)合；或通過質(zhì)譜儀檢測可以篩選出與靶RNA結(jié)合的蛋白。生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強(qiáng)度最高的非共價作用；其中活化生物素可以在蛋白質(zhì)交聯(lián)劑的介導(dǎo)下，與已知的幾乎所有生物大分子偶聯(lián)。因此...

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DNA pull down實(shí)驗(yàn)技術(shù)

DNApulldown實(shí)驗(yàn)技術(shù)1.實(shí)驗(yàn)原理DNApulldown是體外研究DNA與蛋白互作的有力工具。該技術(shù)將生物素標(biāo)記的DNA片段結(jié)合在鏈霉親和素磁珠上，再與細(xì)胞核蛋白孵育，純化出與DNA片段互作的蛋白，洗滌洗脫得到的蛋白產(chǎn)物，做Westernblot檢測特定蛋白是否與靶DNA片段結(jié)合；做質(zhì)譜鑒定即可篩選出與DNA片段可能互作的蛋白信息(如：轉(zhuǎn)錄因子、組蛋白等)。生物素與鏈霉親和素間的作用是目前已知強(qiáng)度最高的非共價作用；其中活化生物素可以在蛋白質(zhì)交聯(lián)劑的介導(dǎo)下，與已知的幾乎...

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GST pull down實(shí)驗(yàn)技術(shù)

GSTPulldown實(shí)驗(yàn)技術(shù)1.實(shí)驗(yàn)原理Pulldown技術(shù)是將"誘餌"蛋白與一種易于純化的配體標(biāo)簽（如：GST標(biāo)簽、His標(biāo)簽）進(jìn)行融合表達(dá)，而帶標(biāo)簽的誘餌蛋白能被特異結(jié)合該標(biāo)簽的固相親和配基捕獲，形成"次級親和支持物"，用于純化與誘餌蛋白相互作用的其他蛋白。純化產(chǎn)物洗脫后，經(jīng)Westernblot驗(yàn)證或LC-MS/MS，即鑒定與誘餌蛋白互作的蛋白。1988年Smith等利用谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶（GST）融合標(biāo)簽從細(xì)菌中一步純化出GST融合蛋白。從此，GST融合蛋白在蛋白...

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常用的細(xì)胞凋亡檢測方法【大盤點(diǎn)】

細(xì)胞凋亡人體內(nèi)的細(xì)胞注定是要死亡的，有些死亡是生理性的，有些死亡則是病理性的，有關(guān)細(xì)胞死亡過程的研究，已成為生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究的一個熱點(diǎn)。已知的細(xì)胞死亡方式起碼有兩種，即細(xì)胞壞死與細(xì)胞凋亡(apoptosis)。細(xì)胞壞死是早已被認(rèn)識到的一種細(xì)胞死亡方式，而細(xì)胞凋亡則是逐漸被認(rèn)識的一種細(xì)胞死亡方式。此圖片來源于網(wǎng)絡(luò)細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的一種基本生物學(xué)現(xiàn)象，在多細(xì)胞生物去除不需要的或異常的細(xì)胞中起著必要的作用。它在生物體的進(jìn)化、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定以及多個系統(tǒng)的發(fā)育中起著重要的作用。細(xì)胞凋亡不僅...

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【表觀遺傳】中樞性性早熟研究

中樞性性早熟（CPP）是兒科內(nèi)分泌的常見疾病，發(fā)病率較高，且逐年增加趨勢明顯。CPP可以導(dǎo)致患者或者家長出現(xiàn)社會、心理問題，而且還可能嚴(yán)重?fù)p害兒童的終身高。因此，CPP是兒科內(nèi)分泌醫(yī)生密切關(guān)注的疾病之一。CPP發(fā)病原因目前尚不明確，可能是由于某種因素促發(fā)了下丘腦促性腺激素釋放激素（GnRH）神經(jīng)元，使其提前活化，通過分泌大量的GnRH，進(jìn)而激活下丘腦-垂體-性腺軸。5-羥色胺（5-HT）最初在血清中發(fā)現(xiàn)，又名血清素，是一種吲哚衍生物，它廣泛存在于哺乳動物中。5-HT由色氨酸代...

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細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)及其定制化解決方案常用的細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)實(shí)驗(yàn)，主要包含：細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞保種、原代細(xì)胞分離和培養(yǎng)、細(xì)胞增殖檢測（MTT法/CCK8法）、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞周期、細(xì)胞遷移、細(xì)胞侵襲、流式細(xì)胞分選、慢病毒包裝及穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選、電生理檢測、定制化細(xì)胞模型等。原代細(xì)胞分離我司可提供細(xì)胞培養(yǎng)和原代細(xì)胞分離的服務(wù)。例如：原代schwann細(xì)胞、原代海馬神經(jīng)元細(xì)胞、原代成骨細(xì)胞、臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞、海綿體平滑肌細(xì)胞等。細(xì)胞培養(yǎng)與傳代細(xì)胞凍存/保種細(xì)胞復(fù)蘇細(xì)胞換液培養(yǎng)細(xì)胞傳代培養(yǎng)細(xì)胞共培養(yǎng)細(xì)...

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